ISOLASI BAKTERI ASAM LAKTAT PADA YOGHURT

A. PENDAHULUAN

Isolasi merupakan suatu teknik yang digunakan untuk memisahkan salah satu jenis bakteri yang kita inginkan dari bakteri yang lainnya sehingga kita bisa mendapatkan kultur atau biakan yang lebih murni dari bakteri yang kita inginkan tersebut. Teknik isolasi yang sering digunakan diantaranya adalah denga penggoresan, tuang, sebar dan mikromanipulator (Bukle, 2001).

Isolasi bakteri membutuhkan banyak syarat baik teknis maupun non teknis. Bakteri merupakan makhluk hidup yang sangat sensitif dengan lingkungan tempat tinggalnya, oleh karena itu persyaratan lingkungan yang menguntungkan harus terpenuhi agar isolasi yang kita lakukan berhasil. Hal yang harus diperhatikan diantaranya adalah suhu, pH, AW, sumber nutrisi yang banyak terdapat dalam media agar yang kita gunakan dan lain sebagainya. Jika mereka sudah mendapatkan lingkungan yang optimum untuk hidup dan berkembangbiak maka kemungkinan besar isolasi yang kita lakukan akan berhasil (Adams, 2000).

Pengembangan dalam cawan petri ada beberapa metode, yaitu:
Metode Cawan Gores (Streak Plate)Prinsip metode ini yaitu mendapatkan koloni yang benar-benar terpisah dari koloni yang lain, sehingga mempermudah proses isolasi. Cara ini dilakukan dengan membagi 3-4 cawan petri. Ose steril yang telah disiapkan diletakkan pada sumber isolat , kemudian menggoreskan ose tersebut pada cawan petri berisi media steril. Goresan dapat dilakukan 3-4 kali membentuk garis horisontal disatu cawan. Ose disterilkan lagi dengan api bunsen. Setelah kering, ose tersebut digunakan untuk menggores goresan sebelumnya pada sisi cawan ke dua. Langkah ini dilanjutkan hingga keempat sisi cawan tergores (Dwijoseputro, 2002).

Begitu pentingnya isolasi bakteri ini dalam mata kuliah fermentasi yang sedang kita pelajari sekarang agar kita dapat mengidentifikasi dan meneliti suatu mikroba dengan pertumbuhan yang diinginkan. Selain itu kita juga harus mengetahui lingkungan optimum yang dapat digunakan untuk mengembangkan mikroba yang kita inginkan dalam sebuah penelitian atau pembelajaran tentang fermentasi secara praktik.

B. Tujuan

Tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui teknik isolasi, inokulasi dan pewarnaan gram bakteri asam laktat pada yoghurt.

C. Alat Dan Bahan

Alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah : 1) Bunsen, 2) Cawan petri, 3) Inkubator, 4) Jarum ose, 5) mikropipet, 6)Tabung reaksi, 7) Tip.

Bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah : 1) Yoghurt Activia 2) Yoghurt botol 3) Yoghurt cup 4) Yoghurt warung.

D. Cara Kerja

Cara kerja pada praktikum ini adalah sebagai berikut :

· Teknik penggoresan kuadran :

1. Yoghurt yang akan diisolasi diencerkan sampai 10^-4

2. Gunakan pengenceran 10^-3 dan 10^-4 untuk mendapatkan bakteri yang baik.

3. Siapkan media agar dan cawan yang telah disterilisasi.

4. Lempengan dibagi menjadi 4 bagian sama besar pada bagian luar dasar cawan

5. Bakteri hasil pengenceran diambil sebanyak 10ml dengan mikropipet

6. Panaskan jarum ose dan biarkan dingin kembali

7. Gores daerah I sesuai dengan teknik penggoresan kuadran,

8. Ulangi prosedur 2 dan 3 sampai seluruh daerah tergores

9. Bungkus cawan petri dengan isolasi atau selotip

10. Inokulasi selama 2 hari didalam inkubator

· Tekning tuang :

1. Yoghurt yang akan diisolasi diencerkan sampai 10^-4

2. Gunakan 10^-3 dan 10^-4 untuk mendapatkan bakteri yang baik.

3. Siapkan media agar dan cawan yang telah disterilisasi.

4. Bakteri hasil pengenceran diambil sebanyak 10ml dengan mikropipet

5. Bakteri dituangkan kedalam media agar yang masih cair

6. Bungkus cawan petri dengan isolasi atau selotip

7. Inokulasi selama 2 hari didalam inkubator

E. HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil

Tabel 1. Hasil isolasi bakteri asam laktat pada yoghurt

Sampel	Metode	Ʃ MO	Bentuk	Warna	Ukuran	Jenis MO
10-3	10-4
y. activia	Tuang (6)	94	64	Tidak teratur	Biru	Besar	Gram (+)
Gores (2)	917	828	Bulat	Biru	Kecil	Gram (+)
y. botol	Tuang	368	184	Bulat	Biru	Besar	Gram (+)
Gores	515	251	Bulat	Biru	Besar	Gram (+)
y. cup	Tuang	411	329	Bulat & lonjong	Biru	Besar	Gram (+)
Gores	945	689	Bulat	Biru	Kecil	Gram (+)
y. warung	Tuang	182	122	Bulat	Biru	Kecil	Gram (+)
Gores	273	195	Bulat	Biru	Kecil	Gram (+)

Pembahasan

Teknik isolasi mikroba digunakan untuk memisahkan bakteri dari kumpulan bakterri dan mendapatkan bakteri yang murni dari jenis yang kita inginkan. Tujuan utama dari penggoresan dalam isolasi bakteri adalah untuk menghasilkan koloni-koloni bakteri yang  terpisah dengan baik dari suspensi sel yang pekat. Cara ini lebih menguntungkan bila  ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tapi memerlukan ketrampilan yang diperoleh  dengan latihan. Penggoresan yang sempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah (Winarni, 2004).

Penggunaan metode gores yang digunakan adalah metode gores kuadran, dengan medium agar datar dalam cawan petri steril Medium agar datar ini berwarna kekuningan, berfungsi sebagai tempat menggoreskan bakteri dan tempat pertumbuhan koloni bakteri. Keuntungan penggunaan cawan petri adalah untuk memperoleh biakan dengan jumlah yang banyak dan lebih mudah untuk melihat morfologi biakan (Rohimat, 2002).

Hal yang perlu diperhatikan untuk menghindari kontaminasi yaitu masuknya mikroorganisme yang tidak diinginkan. Selanjutnya digoreskan inokulum di permukaan media agar di dalam cawan petri yang telah disediakan dengan menggunakan metode gores mulai dari sisi samping secara merata. Media agar untuk bakteri digunakan media NA (Nutrien Agar), fungsi penggunaan medium NA karena komposisinya yang terdiri dari ekstrak daging sapi didalamnya yang mengandung protein, karbohidrat, vitamin, dan sedikit lemak.

Isokulasi dilakukan selama 2 hari atau 2x24 jam dengan tujuan mendapatkan bakteri dalam fase pertumbuhan terbaiknya. Posisi cawan petri diletakkan terbalik karena selama inkubasi terbentuk air yang mengembun di dalam cawan petri. Air akan menetes dari tutup cawan ke permukaan. Hal ini akan menghasilkan suatu masa pertumbuhan yang menganak sungai dan menghancurkan pembentukan koloni secara individu. Untuk menghindari hal ini, maka ketika diinkubasi, bagian bawah cawan petri diletakkan di atasatau terbalik .

Mikroorganisme dibagi menjadi 2 golongan besar berdasarkan perbedaan dinding selnya, yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Praktikum ini akan membahas 2 metode yang dapat dilakukan untuk mengetahui apakah bakteri tersebut merupakan gram positif ataupun gram negatif. Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah salah satu teknik pewarnaan yang bisa digunakan untuk mengidentifikasi bakteri. Dalam proses ini, olesan bakteri yang sudah terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut : zat pewarna kristal violet, larutan iodin, larutan alkohol, dan zat pewarna safranin. Bakteri Gram positif akan mempertahankan zat pewarna kristal violet dan karenanya akan tampak berwarna ungu tua di bawah mikroskop. Adapun bakteri gram negatif akan kehilangan zat pewarna kristal violet dan hanya berwarna merah bata. Perbedaan warna ini disebabkan oleh perbedaan dalam struktur kimiawi dinding selnya. Dari uji pewarnaan gram yang telah dilakukan diketahui bahwa Bakeri asam laktat dalam yoghurt merupakan bakteri gram positif, hal ini dapat diketahui dari warnanya yang berwarna biru keunguan.

F. KESIMPULAN

Dari hasil praktikum yang telah kita lakukan, dapat disimpulkan bahwa :

1. Teknik isolasi dilakukan untuk memisahkan bakteri sehingga didapatkan biakan yang murni.

2. Salah satu teknik inokulasi yang dapat digunakan adalah teknik goresan kuadran.

3. Jarum ose mempunyai peran yang sangat penting dalam teknik inokulasi, yaitu digunakan untuk menggores mikroba.

4. Sebelum digunakan jarum ose harus disterilisasi dengan bunsen agar tidak terjadi kontaminasi.

5. Teknik pewarnaan gram digunakan untuk mengetahui jenis bakteri tersebut, apakah gram positif atau gram negatif.

DAFTAR PUSTAKA

Adams.2000. Analisis Kualitatif Bakteri Koliform Pada Depo Air Minum Isi Ulang

Di Kota Singaraja Bali. Jurnal Ekologi Kesehatan Vol 3 No 1, April

2004 : 64 – 73.

Buckle.2001. Foodborne Microorganisms of Public Health Significance. 4ed.. AIFST

(NSW Branch).Australia.

Dwijoseputro.2002.Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan : Jakarta.

Rohimat.2002 .Mikrobiologi umum. UMM Press, Malang.

Winarni.2004. Diktat Teknik Fermentasi. Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS :

Surabaya.

LAMPIRAN PERHITUNGAN

Ø Metode Tuang :

Ʃ MO = X x

· Ʃ MO yoghurt Activia = 94 x = 94 x 10³ = 94.000/ ml

· Ʃ MO yoghurt Activia = 64 x = 64 x 10⁴ = 640.000 / ml

Ø Metode Gores :

Ʃ MO = X x

· Ʃ MO yoghurt Activia = 917 x = 917 x 10³ = 917.000 / ml

· Ʃ MO yoghurt Activia = 828 x = 828 x 10⁴ = 8.280.000 / ml